人 Treg 试剂盒操作步骤-技术前沿-资讯-生物在线

人 Treg 试剂盒操作步骤

作者:杭州联科生物技术股份有限公司 2018-12-06T10:03 (访问量:6133)


1. 制备 PBMC,并调整细胞浓度至 10^7/ml。


2. 在每个流式上样管中加入 100 μl 准备好的细胞悬液,细胞数约为 1×10^6 个。


3. 按照细胞表面抗原染色方法标记 CD4 和 CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量(一般来说是 20ul,可能随批次有差异)。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。4℃ 孵育 30 分钟。


4. 用预冷 PBS 溶液洗涤细胞,300-400 g 离心 5 分钟,去上清。


5. 用 3 倍体积的固定/破膜稀释液 稀释 固定/破膜浓缩液,制成固定/破膜工作液,注意要新鲜配制,每个样本的用量为 1ml。


6. 旋涡震荡重悬细胞后加入 1ml 的固定/破膜工作液(Fixation/Permeabilization)(1:3 稀释好),并再次旋涡混匀。


7. 避光 4℃ 孵育 30 分钟到 60 分钟。


8. 将破膜缓冲液用去离子水 1:9 稀释,制成工作液。每个样本的用量为 8.5ml。


9. 无需洗涤,直接加入 2ml 破膜缓冲液工作液(Permeabilization Buffer)300-400 g 离心洗涤细胞并弃去上清液。


10.(可选)重复第 9 步操作洗涤细胞。


11. 加入 100 ul PBS 重悬细胞。


12.(封闭可选)体系中加入 2%的大鼠血清 2 ul,室温避光孵育 30 分钟。


13. 体系加入适量的 Foxp3 抗体,对照管中加入适量的同型对照,具体用量参照说明书,避光 4℃孵育至少 30 分钟。建议进行预实验摸索出抗体的最适浓度。


14. 加入 2ml 破膜缓冲液工作液离心洗涤细胞并弃去上清液。


15. 重复上一步洗涤细胞。


16. 用适量体积的 Flow Cytometry Staining Buffer 重悬细胞,并上机检测并分析。注:由于染色过程中使用了细胞固定和破膜,对比起活细胞在形态上会有一定变化(一般是变小),因此 FSC/SSC 图中圈门时需要做一定调整。


注:以上说明书仅供参考,具体实验请对照附件厂商说明书操作。

杭州联科生物技术股份有限公司 商家主页

地 址: 浙江省杭州市拱墅区祥园路108号智慧信息产业园三期三号楼13层

联系人:

电 话: 4006721600

传 真: 4006721600

Email:network@liankebio.com

相关咨询

新品速递 | 前列腺素E2(PGE2)ELISA Kit (2019-07-15T09:52 浏览数:3329)

做流式有一套|你知道的Treg,答题抽奖好礼不停 (2019-03-11T09:42 浏览数:5145)

联科生物喊你吃年夜饭啦! (2019-01-25T13:37 浏览数:6675)

在皮氏培养皿中生长的血管与人类血管非常相似 (2019-01-23T15:04 浏览数:5422)

Human ELISA Kit 推荐:人降钙素ELISA试剂盒 (2019-01-10T14:35 浏览数:5273)

联科生物新品:妊娠研究相关试剂盒 (2019-01-09T17:05 浏览数:5910)

联科生物第四季ELISA大赛——杭州站 (2019-01-04T15:33 浏览数:6097)

全血 Foxp3 实验操作步骤 (2018-12-10T09:52 浏览数:6676)

人 Treg 试剂盒操作步骤 (2018-12-06T10:03 浏览数:6133)

流式胞内染色步骤 (2018-11-12T11:34 浏览数:7901)

ADVERTISEMENT