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多特异性亲和-博格隆Heparin亲和填料应用案例分享

作者:博格隆(浙江)生物技术有限公司 暂无发布时间 (访问量:7759)

背景介绍

什么是肝素

肝素(Heparin)因首先从肝脏发现而得名,天然存在于肥大细胞,现在主要从牛肺或猪小肠提取。肝素是一种黏多糖硫酸脂,由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成。

临床应用及研究显示,肝素除具有抗凝作用外,还具有多种生物活性和临床用途。肝素与多种生物分子都具有亲和作用,基于这一特性,博格隆将其共价偶联到高交联度琼脂糖上,制成一种族特异性亲和层析介质——Heparin Bestarose FF。

Heparin Bestarose FF具有物理及化学稳定、配基不易脱落、使用寿命长、应用范围广泛、容易放大等特点。

肝素亲和填料的主要特性

• 高载量:≥2.0mg bovine AT III/mL填装介质。

• 高选择性:特异性亲和配基,高效纯化目标蛋白。

• 高稳定性:耐受常用溶剂,如8M尿素、6M盐酸胍、0.1M NaOH、4M NaCl等进行清洁。

肝素亲和填料的应用领域

药品

与一般亲和介质的不同之处在于,肝素与近百种蛋白都具有亲和作用,因此Heparin Bestarose FF可广泛应用于各种生物分子特别是各种酶类的分离纯化,包括抗凝血酶III、类凝血酶、人凝血因子IX、XI、VIII、脂蛋白脂肪酶、胶原酶、DNA聚合酶等;也能和人白介素、人前列腺生长因子、重组人血管内皮生长因子、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子II、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合。

食品

肝素亲和填料除了以上在制药领域中应用以外,在食品领域也有应用。国家标准GB5009.299—2024《食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》于2024-02-08发布,并于2024-08-08实施。根据该国标,测定食品中乳铁蛋白的含量,需使用磷酸盐缓冲液提取试样,并且使用肝素亲和柱富集净化后,再进行测定。

Heparin Bestarose FF应用案例

Heparin Bestarose FF能从血浆蛋白中特异性地结合并分离抗凝血酶 Ⅲ,这种蛋白具有极强的抗凝血作用,可用于治疗血栓性疾病。

Heparin Bestarose FF从血浆中纯化抗凝血酶III

• 层析柱及介质:EzFast 1mL,Heparin Bestarose FF

• 样品:某动物血浆

• 结合缓冲液:0.1M Tris,0.15M NaCl,pH7.4

• 清洗缓冲液:0.1M Tris,0.33M NaCl,pH7.4

• 洗脱缓冲液:0.1M Tris,2.0M NaCl,pH7.4

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Fig. 1 纯化后样品SDS-PAGE图

使用Tips

缓冲液

• 结合缓冲液:20~50mM PB或Tris,pH7.4~8.0,可以加入0.15M NaCl抑制非特异吸附。

• 洗脱缓冲液:20~50mM PB或Tris,1~2M NaCl,pH7.4~8.0。NaCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整。

流速

根据柱子的高度一般选用60~300cm/h的流速,柱高越大流速越慢。

清洗

定期的清洗能有效防止污染物的累积,保持层析介质稳定的工作状态。对于不同类型的杂质和污染物建议清洗条件如下:

• 离子键结合蛋白的去除:先用3~5个柱体积 2M NaCl清洗,后用3~5个柱体积纯水清洗。

• 沉淀或变性蛋白的去除:先用2个柱体积 0.1M NaOH清洗,后用5~10个柱体积纯水清洗,也可用6M盐酸胍或8M尿素清洗。

• 疏水性结合的蛋白的去除:先用0.1%~0.5%的非离子去污剂清洗,后用3~5个柱体积纯水清洗。

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